on style="white-space: normal; text-indent: 2em;">推荐发表在ACS Central Science上的文章，题目是“In Vivo Measurement of Granzyme Proteolysis from Activated Immune Cells {attr}3185{/attr} PET”，通讯作者是美国UCSF的Charles S. Craik教授和Michael J. Evans教授。
免疫细胞会分泌颗粒酶来使问题细胞促凋亡，在免疫细胞和靶细胞对接后，瞬时地释放颗粒酶在两者之间的小空间内，然后再进入靶细胞细胞质，执行凋亡相关功能。目前的研究中，有些颗粒酶功能尚不清楚，而且失调的颗粒酶分泌和酶解会导致疾病。此外，目前对颗粒酶的体外研究相对较为简单，活体研究对象老鼠体系又和人类体系大有不同。因此，发展对于人类细胞的体内研究方法是十分重要的。正电子断层扫描（PET）是可以在深层组织中都能高分辨成像的技术，因此作者计划运用该方法，再设计一个放射性同位素可供颗粒酶切割的限制性肽段，用于研究颗粒酶的活性。
首先，对于该限制性相互作用肽段GRIP B的设计有三点，一是N端的非毒性抗菌肽（AMP）偶联放射性同位素，二是中间特异性地被颗粒酶GZMB切开的位点，三是C端用来阻碍AMP形成螺旋结合到磷脂层的掩盖区域，而在酶解后，N端部分可以和靶细胞结合再测定，组织中的放射性分布就能反应颗粒酶的活性。在对于中间段特异性切割位点的选择上，他们在200多个8氨基酸的序列库里进行筛选，并通过质谱测定肽段序列。结果显示，XXPDXXXX序列最优，于是他们选择了IEPDVSQV进行之后的实验。然后，作者在选好的肽段上合成5FAM标签，并通过流式进行测定。结果显示，GRIP B和靶细胞结合很弱，但是当用颗粒酶提前孵育后，肽段结合靶细胞的能力增强，而且均没有细胞毒性。接下来，为了连上螯合剂进行放射性标记，他们在N端的苯基丙氨酸上连接了DOTA-NHS酯，再用64Cu进行放射性标记。因为其半衰期较长，所以允许找到成像的最佳时间点，优化条件。之后，作者也通过和不能切割的负对照GRIP B对比，证明了他们设计的放射性GRIP B对颗粒酶的特异性。免疫调节疗法也能影响该方法呈现出的放射性生物分布，能够检测到in vivo T细胞的激活。
原文链接：https://doi.org/10.1021/acscentsci.1c00529原文引用：10.1021/acscentsci.1c00529
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